—Realice todos los frotis bacterianos para las diferentes tinciones.
Figura 2. Procedimientos para la obtención de un frotis bacteriano.
Tinción simple (figura 3)
—Tome los portaobjetos que contienen los frotis destinados para la tinción simple. Para este caso se recomienda trabajar con los frotis de las bacterias S. aureus y B. cereus.
—Deposite ahora los portaobjetos en la rejilla y proceda a teñirlos agregando sobre las muestras el colorante azul de metileno o violeta de genciana. Déjelos actuar por un minuto.
—Elimine el colorante y lave con agua. Seque con papel absorbente presionando suavemente los portaobjetos y luego exponiéndolos suavemente a la llama del mechero.
—Observe las preparaciones al microscopio, primero con los objetivos de menor aumento (10X, 40X), agregue una gota de aceite de inmersión y enfoque con el objetivo de inmersión (100X).
—Identifique la morfología y agrupación de las bacterias observadas y esquematícelas.
—Terminada la observación, elimine las preparaciones en la bandeja.
Figura 3. Procedimientos básicos para la tinción simple.
Tinción de Gram (figura 4)
—Tome los portaobjetos que contienen los frotis destinados para la tinción de Gram. Para este caso se recomienda trabajar con los frotis de las bacterias E. coli, S. aureus y B. cereus.
—Deposite ahora los portaobjetos con su muestra fijada sobre la rejilla.
—Tiña con cristal violeta durante un minuto.
—Elimine el colorante y lave suavemente con agua.
—Aplique lugol (mordiente) durante un minuto.
—Elimine el lugol y lave con agua.
—Decolore con una solución de alcohol-acetona durante 10-30 segundos (el tiempo dependerá del grosor del frotis).
—Elimine el alcohol-acetona y lave con agua.
—Tiña con fucsina o safranina (contraste) por un minuto.
—Elimine el colorante de contraste y lave con agua.
—Seque con papel absorbente presionando suavemente los portaobjetos y luego expóngalos de forma muy suave a la llama del mechero.
—Observe las preparaciones al microscopio, primero con los objetivos de menor aumento (10X, 40X) y busque la zona donde depositó la muestra. Una vez logrado esto, enfoque con el objetivo de inmersión (100X) tal como lo hizo en la tinción simple.
—Termine la observación identificando la morfología, la agrupación y la reacción al Gram de las bacterias observadas y esquematícelas.
—Elimine las preparaciones en la bandeja.
Figura 4. Pasos de la tinción de Gram.
Tinción de Wirtz (figura 5)
—Tome el portaobjeto que contiene el frotis para la tinción de Wirtz. Para este caso se trabajará con el extendido de la bacteria B. cereus.
—Deposite ahora el portaobjeto con su muestra fijada sobre la rejilla.
—Tiña de 6 a 8 minutos con verde de malaquita al 7,6% con calor del mechero y sin dejar secar el colorante.
—Elimine el colorante y lave con agua por 10 a 15 segundos.
—Tiña con una solución al 0,25% de safranina por quince segundos.
—Elimine la safranina y lave con agua.
—Seque con papel absorbente presionando suavemente el portaobjeto y luego expóngalo de forma muy suave a la llama del mechero.
—Observe con el objetivo de inmersión (100X) como de costumbre.
—Identifique las esporas bacterianas de manera libre (exosporas) o en su defecto las endosporas. Esquematice lo observado.
—Terminada la observación, elimine la preparación en la bandeja.
Figura 5. Procedimientos de la tinción de Wirtz.
Tinción de Ziehl-Neelsen (figura 6)
—Tome el portaobjeto que contiene el frotis para la tinción de Zielh-Neelsen. Para este caso se trabajará con el extendido de la bacteria M. tuberculosis.
—Deposite ahora el portaobjeto con su muestra fijada sobre la rejilla.
—Cubra la preparación con fucsina fenicada y deje actuar por cinco minutos con calor del mechero hasta desprender vapores, pero sin dejar secar el colorante.
—Elimine el colorante y lave con agua de 10 a 15 segundos.
—Decolore con alcohol ácido durante 10-20 segundos.
—Elimine el alcohol ácido y lave con agua.
—Tiña con azul de metileno como colorante de contraste durante 2 minutos.
—Elimine el colorante y lave con agua de 10 a 15 segundos.
—Seque con papel absorbente presionando suavemente el portaobjeto y luego expóngalo de forma muy suave a la llama del mechero.
—Observe con el objetivo de inmersión (100X) como de costumbre.
—Identifique las células bacterianas AAR teñidas de color fucsia y esquematícelas.
—Terminada la observación, elimine su preparación en la bandeja.
Figura 6. Pasos de la tinción de Zielh-Neelsen.
Complete las siguientes tablas de acuerdo con las tinciones realizadas:
Preguntas complementarias
