берут среднее значение максимального разведения, при котором отсутствует развитие тест-организма, и минимальное разведение, при котором начинается его развитие.
Методом последовательных разведений можно определить количество антибиотика не только в условных единицах разведения, но и в весовых или стандартных единицах. Для этой цели титрование (разведение) должно проводиться стандартным раствором данного антибиотика, имеющего известную активность, выраженную в мкг/мг или в ед/мг препарата.
Например, необходимо определить концентрацию стрептомицина, содержащуюся в культуральной жидкости Str.griseus. Делают ряд разведений культуральной жидкости, освобожденной от мицелия, а параллельно таким же способом делают разведение стандартного раствора стрептомицина, содержащего, например, 10 мкг/мл.
Разведение испытуемой жидкости и разведение стандартного раствора антибиотика необходимо проводить в бульоне с фосфатным буфером при рН 7,8-8,0.
Пример расчета приведен в таблице 6.
Таблица 6 – Определение концентрации стрептомицина методом последовательных разведений
В данном случае (таблице 6) 10 мкг/мл стрептомицина подавляют развитие тест-культуры в наибольшем разведении, соответствующем 5-й пробирке. Следовательно, 5 мкг/мл вызвали бы подавление роста микроба только в 4-й пробирке, но не в 5-й, а 20 мкг/мл задержат рост в 6-й пробирке, 40 мкг/мл – в 7-й; 80 мкг/мл – в 8-й; 160 мкг/мл – в 9-й; 320 мкг/мл – в 10-й пробирке и т.д.
Сравнивая эти величины, устанавливают, что испытуемый раствор, задерживающий развитие тест-организма в 10-й пробирке (разведение 1:1024), содержит 320 мкг/мл стрептомицина.
Расчет антибиотической активности испытуемого раствора при работе по методу последовательных разведений при наличии стандарта можно производить по следующей формуле
где Ри – максимальная степень разведения испытуемого раствора, при которой отсутствует рост тест-организма;
Рс – максимальная степень разведения стандартного раствора, обеспечивающая отсутствие роста тест-микроба;
С – исходная концентрация стандартного раствора антибиотика;
Х – искомая концентрация антибиотика в исследуемом растворе.
В нашем примере Ри=1024, Рс=32, С=10 мкг/мл; искомая концентрации антибиотика
X = 1024: 32 × 10 = 320 мкг/мл.
Метод последовательных разведений может дать сопоставимые результаты лишь при соблюдении определенных условий, а именно:
1) тщательная стерильность проведения анализов;
2) использование постоянных сред для разведения одного итого же антибиотика;
3) внесение определенного количества клеток или спор тест-организма;
4) определенная длительность инкубации пробирок, засеянных тесткультурой;
Иногда под действием испытуемого антибиотика возникают
