un cubreobjetos y observar al microscopio con objetivos de 10X y 40X.
El examen directo en solución salina es útil para observar trofozoítos en movimiento, quistes y ooquistes.
Examen directo en solución de yodo o lugol
Materiales y reactivos
Los materiales y reactivos necesarios para este método son: portaobjeto, cubreobjetos y lugol (ver anexo 2) (8,9).
Procedimiento
Seguir los pasos descritos para el examen en solución salina fisiológica, pero en lugar de la solución salina, emplear una gota de solución yodada o lugol. Con esta técnica, se visualizan estructuras de los quistes y ooquistes, como los depósitos de glucógeno de color pardo rojizo, el citoplasma de coloración amarilla y el núcleo con la morfología característica de cada especie. Los trofozoítos se inmovilizan y se deforman de manera considerable.
Método de concentración de formol-éter
Materiales y reactivos
Los materiales y reactivos necesarios para este método son: vasos desechables, aplicadores, bajalenguas, gasas, tubo de centrífuga, portaobjetos, cubreobjetos, formol al 10 % (ver anexo 3), éter etílico, solución salina al 0.85 % (ver anexo 1) y lugol (ver anexo 2) (8,10).
Procedimiento
1. Tomar aproximadamente 1 g de materia fecal con un bajalenguas y colocar la muestra en un vaso desechable.
2. Agregar 10 ml de formol al 10 % y homogenizar.
3. Filtrar a través de gasa doble en un tubo de centrífuga.
4. Agregar 1 ml de éter etílico y mezclar vigorosamente durante un minuto.
5. Centrifugar a 800 g durante 5 minutos.
6. Eliminar el sobrenadante.
7. Mezclar el sedimento con un aplicador y realizar el montaje en solución salina al 0.85 % y solución de lugol, como se describió en el aparte que referencia el examen directo en materia fecal.
Con este método se aumenta la probabilidad de encontrar los quistes u ooquistes de los protozoarios en las muestras.
Técnica de Ritchie-Frick modificada
Materiales y reactivos
Los materiales y reactivos necesarios para este método son los mismos que se utilizan en el método de concentración de formol-éter y solución alcohólica (ver anexo 4) (3,11,28).
Procedimiento
Con el fin de identificar protozoos intestinales, primero se lleva a cabo el protocolo para la identificación de helmintos y luego se continúa con el procedimiento para la identificación de protozoos.
Identificación de helmintos
1. Mezclar 2 g de materia fecal y 15 ml de formol al 10 % en un frasco.
2. Homogenizar y mezclar por agitación.
3. Filtrar a través de dos capas de gasa en tubo de centrífuga.
4. Centrifugar a 800 g durante 10 minutos.
5. Anotar el volumen del sedimento y descartar el sobrenadante.
6. Multiplicar el volumen del sedimento por 7, agregar este valor en volumen de solución alcohólica y mezclar.
7. Colocar 0.05 ml de la suspensión en un portaobjetos, colocarle un cubreobjetos y observar al microscopio.
8. Realizar los recuentos de huevos y larvas de helmintos, promediar y multiplicar el valor por 160 en cada caso; este valor corresponde al número de huevos o larvas por mililitro de heces filtradas y sedimentadas.
Identificación de protozoarios
1. Completar el volumen restante de la suspensión anterior con solución alcohólica y centrifugar a 800 g durante 10 minutos.
2. Eliminar el sobrenadante y agregar el mismo volumen de solución alcohólica.
3. Agregar 3 ml de éter y homogenizar.
4. Centrifugar a 800 g durante 10 minutos.
5. Eliminar el sobrenadante.
6. Colocar en un portaobjetos una gota de la suspensión para lugol y solución salina al 0.85 %, colocar un cubreobjetos y observar al microscopio con objetivos de 10X y 40X, que posean micrómetro ocular.
Este método aumenta la probabilidad de encontrar los quistes u ooquistes de los protozoarios en las muestras examinadas.
Reporte de resultados
Las especies patógenas y no patógenas halladas en la muestra deben ser reportadas. Si se encuentran especies no patógenas, se considera como un indicio de que el paciente ha ingerido alimentos o bebidas contaminadas con materia fecal, lo cual sugiere una asociación con especies patógenas (29,30). Si se encuentran formas parasitarias morfológicamente compatibles con E. histolytica, se debe reportar como complejo E. histolytica/E. dispar/E. moshkovskii (31).
Identificación del complejo Entamoeba histolytica/ Entamoeba dispar/Entamoeba moshkovskii
A continuación, se describen las técnicas utilizadas para la identificación del complejo E. histolytica/E. dispar/E. moshkovskii, las cuales incluyen el examen con azul de metileno amortiguado y las coloraciones especiales.
Examen con azul de metileno amortiguado
Materiales y reactivos
Los materiales y reactivos necesarios para este método son: portaobjetos, cubreobjetos, tubo de ensayo, aplicador, solución amortiguadora de acetato (ver anexo 17) y azul de metileno amortiguado (ver anexo 18) (7,31,32).
Procedimiento
1. Tomar una pequeña cantidad de materia fecal con un aplicador y llevarla a un tubo de ensayo.
2. Mezclar con una pequeña cantidad de azul de metileno amortiguado.
3. Incubar a 37 °C durante 15 minutos.
4. Hacer el montaje en un portaobjetos y colocarle un cubreobjetos.
5. Examinar la preparación en 10X y 40X.
A través de esta técnica, es posible observar las características morfológicas del núcleo de los trofozoítos. Esta característica y otros aspectos morfológicos enumerados en la tabla 1.2 facilitan la diferenciación de los trofozoítos de
